目的 探讨CpG甲基转移酶M.SssI对人结肠癌HT-29细胞中紧密连接蛋白7(claudin-7)和claudin-8表达的调节作用,及其对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法 以50 U/ml的M.SssI处理HT-29细胞24h(过甲基化组),采用重亚硫酸盐测序法检测claudin-7和claudin-8基因启动子区域CpG岛的甲基化状态,实时荧光定量PCR法检测claudin-7和claudin-8 mRNA的表达,细胞免疫荧光技术和Western blot法检测claudin-7和claudin-8蛋白的表达,Hoechst 33342荧光染色法和流式细胞术检测HT-29细胞的凋亡,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测HT-29细胞的增殖.同时设对照组(以2μlPBS处理HT-29细胞)和5-Azacytidine组(以10μmol/L 5-Azacytidine处理HT-29细胞).结果 过甲基化组claudin-7和claudin-8靶序列中发生甲基化的CpG胞嘧啶数目分别为25和10个,对照组分别为9和5个,5-Azacytidine组分别为0和3个.过甲基化组claudin-7和claudin-8mRNA和蛋白的表达均明显低于对照组(均P＜0.05),而5-Azacytidine组claudin-7和claudin-8mRNA和蛋白的表达均明显高于对照组(均P＜0.05).Hoechst 33342荧光染色结果显示,对照组和5-Azacytidine组的HT-29细胞均呈均匀蓝色荧光,细胞呈圆形,大小一致,无明显差异；而过甲基化组HT-29细胞呈高度白色荧光的凋亡细胞明显增多.流式

作者：王文辉；汪芳裕；魏娟；沈芸竹；刘畅；舒小闯

来源：中华肿瘤杂志 2013 年 35卷 6期