目的以复制缺陷型腺病毒为载体,构建vasostatin基因重组腺病毒,并观察其对胰腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法以人肌肉cDNA文库为模板应用PCR的方法扩增出vasostatin的DNA片断,定向插入腺病毒穿梭质粒pshuttle-CMV经酶切、测序鉴定正确后,电穿孔法将重组穿梭质粒转化E. coli BJ5183-AdEasy-1感受态细菌,行细菌内同源重组.将抗性筛选和酶切鉴定正确的重组质粒pAd-CMV-vasostatin转染293细胞进行包装.病毒扩增纯化后,病毒感染人胰腺癌细胞,RT-PCR和Western印迹法检测vasostatin的表达状况.复制人胰腺癌裸鼠移植瘤模型,瘤内注射107pfu pAd-CMV-vasostatin、108pfu pAd-CMV-LacZ及PBS,观察移植瘤的生长曲线及瘤重.结果PCR产物电泳后可见长度为560bp左右的目的条带;酶切及测序鉴定表明穿梭质粒pshuttle-CMV中插入了vasostatin的DNA片断;卡那霉素抗性筛选及Pac Ⅰ酶切鉴定证实腺病毒重组质粒pAd-CMV-vasostatin构建成功;转染293细胞7天后观察到细胞病理学效应出现.PCR鉴定表明重组腺病毒中含有vasostatin片断.RT-PCR和Western印迹法证实vasostatin mRNA及蛋白的表达.治疗后3周pAd-CMV-vasostatin组移植瘤的体积及瘤重均显著小于pAd-CMV-LacZ组及PBS组.结论含有vasostatin基因的重组腺病毒构建成功,并可显著抑

作者：李雷；袁耀宗；章永平；乔敏敏；卢健

来源：肿瘤 2004 年 24卷 6期