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目的:阐明HCCS1基因启动子的转录调控机制.方法:引物延伸法确定HCCS1基因的转录起始点,通过限制性内切酶酶切介导对HCCS1基因全长启动子做进行性的5缺失,用瞬时转染/双荧光素酶报告系统确定最小启动子,连接体扫描突变分析来确定启动子功能的关键顺式序列区,电泳迁移率实验并附以抗体介导超迁移实验来确定关键的反式因子.结果:HCCS1基因的转录起始点被定位于-177/-178处的C残基(ATG为+1).最小启动子位于-60~+148区(转录起始点为+1)之中.在关键的调控区(+1~+40)所含的已知顺式序列中有2个ETS转录因子识别序列,而不是p53或NF-κB,识别序列与其相应的转录因子(ETS-2)的结合有着重要的功能内涵.结论:ETS-2转录因子与启动子的+1~+40区中相应的顺式序列结合,在肝癌相关基因HCCS1的转录活性中起着关键作用.

作者:王鹏;毛大芩;蓝斐;朱景德

来源:肿瘤 2006 年 26卷 5期

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作者:
王鹏;毛大芩;蓝斐;朱景德
来源:
肿瘤 2006 年 26卷 5期
标签:
肝肿瘤 癌,肝细胞 基因表达调控 基因,肿瘤抑制 基因,HCCS1 SMMC-7721细胞
目的:阐明HCCS1基因启动子的转录调控机制.方法:引物延伸法确定HCCS1基因的转录起始点,通过限制性内切酶酶切介导对HCCS1基因全长启动子做进行性的5缺失,用瞬时转染/双荧光素酶报告系统确定最小启动子,连接体扫描突变分析来确定启动子功能的关键顺式序列区,电泳迁移率实验并附以抗体介导超迁移实验来确定关键的反式因子.结果:HCCS1基因的转录起始点被定位于-177/-178处的C残基(ATG为+1).最小启动子位于-60~+148区(转录起始点为+1)之中.在关键的调控区(+1~+40)所含的已知顺式序列中有2个ETS转录因子识别序列,而不是p53或NF-κB,识别序列与其相应的转录因子(ETS-2)的结合有着重要的功能内涵.结论:ETS-2转录因子与启动子的+1~+40区中相应的顺式序列结合,在肝癌相关基因HCCS1的转录活性中起着关键作用.