目的:采用编码2条短发卡式RNA(shRNA)的抗乙酰肝素酶(heparanase,Hpa)特异性载体干扰卵巢癌细胞中Hpa的表达,观察其对肿瘤生长转移的抑制作用.方法:以脂质体介导的方法将自行设计和构建的抗Hpa短发卡式RNA(Hpa-shRNA)基因真核表达载体稳定转染人卵巢癌细胞SKOV3;流式细胞仪鉴定转染效率,免疫组化和实时定量RT-PCR检测转染前后卵巢癌细胞中Hpa蛋白和mRNA表达,Boyden小室观测细胞增殖和侵袭能力的变化,透射电镜观察卵巢癌细胞超微结构改变.结果:Hpa mRNA表达在SKOVa-Hpa(转染Hpa)明显升高(P＜0.01),SKOV3-Hpa shRNA(转染Hpash RNA)显著降低(P＜0.01),SKOV3 DZ-shRNA(转染非特异性sh RNA片段)和SKOV3无显著性差异(P＞0.05).电镜下,SKOV3-Hpa组Hpa蛋白表达最为明显,SKOV3-Hpa shRNA Hpa蛋白则最低,各组间比较差别有显著性意义(P＜0.01).SKOV3-Hpa细胞器发达,细胞表面绒毛丰富,细胞间连接稀少.SKOV3 Hpa-shRNA以变形为主,细胞表面绒毛少,细胞器不发达,部分见线粒体皱缩,肿胀和空泡样改变.SKOV3-Hpa、SKOV3-DZ-shRNA和SKOV3-Hpa-shRNA 3种细胞穿过人工基底膜的细胞数分别为82.3±9.16,36.1±8.73和18.6±10.5,各组间比较有显著性差异(P＜0.01).结论:双基因Hpa特异性shRNA可显著抑制卵巢癌细胞Hpa表达,降低细胞

作者：刘玉；辛晓燕；毛敬；张潍

来源：肿瘤 2006 年 26卷 11期