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目的 构建表达绿色荧光蛋白( GFP)和人类血管内皮生长因子(VEGF)的重组腺病毒载体,并对其相关指标进行鉴定,观察其对人类鼻咽癌细胞系CNE的感染效果.方法 使用基因工程技术将GFP和人类VEGF siRNA的cDNA通过LR法体外同源重组从质粒载体pGenesil-1上转移至pGSadeno腺病毒表达载体上,得到腺病毒载体pGSadeno-GFP-VEGF,将Pacl线性化的腺病毒DNA转染HEK293细胞,并在其中包装扩增腺病毒.采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中所携带的GFP报告基因,进行病毒滴度的测定和对CNE细胞感染效率的检测.结果 酶切鉴定及PCR结果证明GFP-VEGF shRNA重组腺病毒载体构建成功,病毒滴度达到2×109 PFU/ml,对CNE有较强的感染能力,感染腺病毒后CNE细胞的增殖速率明显下降.结论 应用体外同源重组方法成功构建了表达GFP和VEGF shRNA的重组腺病毒载体.
作者：许斌；彭敏；宋启斌
来源：肿瘤研究与临床 2011 年 23卷 11期
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